熒光素酶檢測實驗
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Luciferase報告基因系統是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的實驗。熒光素底物會在熒光素酶作用下會發光(波長540-600nm),且光強能反應熒光素酶的表達量。熒光素酶的蛋白表達量與啟動子活性、mRNA的穩定性及翻譯效率相關。從而將待測啟動子、UTR等序列與熒光素酶ORF框融合表達,再檢測其發光強度,就能判斷這些序列對蛋白表達的影響。
為了減少實驗誤差,同時轉染一個能穩定表達的腎熒光素酶的質粒作為內參,催化腔腸素氧化產生藍光(波長460-540nm);所以叫雙熒光素酶報告基因檢測。
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1. 重組載體:質粒不少于2ug,或甘油菌約100ul
2. 細胞:活細胞,2個T25瓶,細胞匯合度>80%(廣州市內);或凍存細胞2管(廣州外地區)
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1. 質粒或甘油菌可用冰袋保存運輸;
2. 活細胞常溫取樣;
3. 凍存細胞干冰取樣/運輸:需要至少在送樣前一天通知我方。
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